Изначально доступно 4 игровых персонажа:
Экстон (Спецназовец) - персонаж с общими боевыми навыками и способностью развертывания турели
Майя (Сирена) - женщина со способностью "Захват" противников и управления течением боя.
Сальвадор (Шизострел) - брутальный мастер нанесения урона в ближнем бою, способный на ярость берсерка, и возможностью взять по оружию в каждую руку.
Зер0 (Ассасин) - таинственный убийца, который вооружён мечом и может становится невидимым.Дополнительного пятого персонажа, можно было получить, сделав предзаказ, или же купив дополнение Mechromancer Pack, выпущенное 16 октября за $9.99 или 800 очков Microsoft.
Гейдж (Мехромантка) - девочка-киборг, которая может уничтожать врагов с помощью D374-TP, или Жестокуса (Deathtrap), мощного робота.
Шестого дополнительного персонажа можно получить, купив дополнение Psycho Pack, выпущенное 14 мая за 149 рублей в Steam.
Криг (Псих) - эксперимент корпорации Гиперион. Специализируется на ближнем бою, умеет восстанавливать здоровье при убийстве.
Неосновные персонажи:
Железяка - первый из встреченных в оригинальной игре, все остальные были уничтожены. Помогает игроку свергнуть Джека путем саботажа и мелкими нападениями.
Брик - берсерк из оригинальной игры
Доктор Зед - доктор из оригинальной игры.
Лилит - сирена из оригинальной игры.
Мокси - персонаж из второго и третьего дополнений Borderlands, хозяйка арены Underdome, мать Скутера и Элли.
Крошка Тина - 13-летняя слегка двинутая девочка. Лучший подрывник на Пандоре.
Красавчик Джек - главный противник